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大鼠少突胶质前体细胞的使用和样本的处理方法先容

发布时间:2021-11-17 点击量:42
  大鼠少突胶质前体细胞使用方法:
  1、收到细胞后,请按照以下方法进行操作:取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
  2、细胞传代:
  1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,清洗细胞一次。
  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1m至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中。
  3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬, 然后按1:2比例进行分瓶传代,放入379C, 5%CO2细胞培养箱中培养。
  4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
  3、细胞冻存:
  1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次。
  2)添加胰蛋白酶消化液约1m至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中。
  3)用适量的冻存液悬细胞,并放置于冻存管中。
  4)先将大鼠少突胶质前体细胞冻存管放置于20°C 1.5h,然后将其移,入-80°C过夜, 24h后转 入液氨中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80°C。
  正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的一步,下面简单先容一下不同类型的样本的处理方法:
  1.血清。血清是常用于ELISA检测的一类样本,处理也比较简单,采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
  2.血浆。用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融,避免使用溶血或高血脂的标本。
  3.细胞培养上清,取细胞培养上清到离心管,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
  4.细胞裂解液。
  5.组织匀浆液。
  6、尿液、唾液等其他液体生物样本。
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