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小鼠骨髓间充质干细胞的方法步骤先容

发布时间:2021-07-24 点击量:90
  小鼠骨髓间充质干细胞是一种除造血干细胞以外的、具有多向分化潜能的干细胞,可以向骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化,因此可以作为组织工程中的种子细胞,在适当的条件下,骨髓间充质干细胞可以分化为三个胚层来源的组织细胞而进行细胞移植的治疗,在体外培养扩增后也可种植在生物材料上,回植入机体修复组织损伤。
  充质干细胞在治疗组织器官退行性疾病,遗传缺陷性疾病和基因治疗方面也展现了美好的前景,本产品具有良好的增殖和分化潜能,可分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等,采用干冰保存运输。收到细胞时,若干冰已经完全融化,请马上将细胞复苏培养;若尚留有干冰,请马上将细胞放入液氮中保存待用,请按条件贮存细胞,切不可将细胞置于高温环境。
  方法步骤:
  1、沿着脊髓切开,从身体的躯干剖解后肢,小心不要损伤股骨;
  2、进一步剖解后肢,通过切开膝关节来切开每个后肢;从胫骨和股骨中去除肌肉和结缔组织;将骨干刮干净;
  3、超净台操作,切断骨髓腔末端下方的胫骨和股骨的末端;将装有完整培养基的10 ml注射器上的27号针头插入通过移除生长板暴露的海绵状骨中,用1ml完全培养基将骨髓塞从骨头切开的末端冲洗出来,收集在冰上的10ml管中。
  4、小鼠骨髓间充质干细胞通过70mm过滤网过滤细胞悬液,以去除任何骨针或肌肉和细胞团块; 通过台盼蓝排除法测定细胞的产量和活力,并在血细胞计数器上计数。
  5、在95mm培养皿中培养BM细胞,在1ml完全培养基中,密度为25×106个/mL细胞(基于步骤4中获得的细胞计数);3h后更换新的完全培养基。
  6、再培养8小时后,用1.5ml新鲜的完全培养基替换培养基;此后,每8小时重复该步骤,直至72小时的初始培养。
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